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pcr模板是什么

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拖尾是在目的条带上部,就是说碱基对多,如果我稀释DNA模板,效果就会好的很呐! , 有木有人知道PCR加完buffer负20度保存后,模版加在分离柱里还是加在哪里? 不会不要回答谢谢 , 我是问会不会太多,听人说模板太多了对PCR反应也会有影响 ...

pcr反应模板DNA浓度最低要求是多少?:

模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶:

1、一般普通的酶,DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的

2、高效一点的酶,几ng也可以扩增出来的。

为什么pcr的时候,DNA模板浓度高了,会有拖尾?:

因为pcr利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。DNA模板纯度不纯的时候,会对PCR起抑制作用。PCR反应中,模板只要1ng就可以,所以模板浓度不要太高。

直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。

并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。


扩展资料:

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下。

根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。

耐热DNA聚合酶-Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。

参考资料来源:百度百科-DNA测序

电泳跑出的条带跟我要的目的片段差不多大小,但用PCR产物做模板进行PCR却只有非特异条带,是什么原因: 你想做什么呢?如果两次PCR的引物加的一样那跑出来的结果肯定不是特异性条带。你两次加的PCR引物是一样的吗?我也不是很明白,我们一起讨论吧。

PCR用的目的基因模板是线性的还是环状的?P出来的目的基因产物呢?: 模板线性环状都可以 比如人基因组dna是线性的 质粒是环状的
pcr产物都是线性的
不要说做突变的一个方法是p出环状突变型质粒 其实那个不是pcr 带缺口的双链环状产物不能够用做模板做下一轮的扩增

PCR实验都需要什么试剂啊?: PCR扩增实验需要
模板:DNA双链;
原料:始终带不同碱基的脱氧核糖;
引物;
耐高温的DNA聚合酶

PCR反应中DNA模板的量比原计划多加了会怎样: 没什么影响~但是不能太多~模板正常量要尽量少~毕竟PCR是指数扩增~

有木有人知道PCR加完buffer负20度保存后,模版加在分离柱里还是加在哪里? 不会不要回答谢: 你是要接着做PCR克隆还是干什么?

PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的反应体系: 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!

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